Нет, я не хочу знать перевод 6 саунда трека про Джеремию... там явно такооооой бред.
Дикие вопли Лелуша прерывает орущий Сузаку, ехидничанье Ллойда, Ширли, Каллен... но Апельсин...
"Ейс, ой Мажести" каждые 30 секунд, но это ещё цветочки... Он из себя изобрадает КрейзиФрога издавая звуки заводящегося мотоцикла...
А да, там ещё Шницель и Чарли затесались... и Корни.
А ещё у Апельсина кончилась батарейка...

@темы: Code Geass

---

Второй сезон грядёт... после ребилда первого... вроде.

2006 Haruhi's 1st Episode is Listed as 1st of 2009 Run
posted on 2009-04-01 08:03 EDT

The Yahoo! TV Japan website lists the first episode in the 2009 airing of The Melancholy of Haruhi Suzumiya anime series on Sendai Television (OX) as "Asahina Mikuru no Bōken Episode 00" ("Mikuru Asahina's Adventure Episode 00"). This was also the first episode to air in the original 2006 premiere of the anime series. However, it is not the first episode chronologically in the storyline. A representative of the Japanese publisher Kadokawa Shoten had said in February that this year's "renewed" airing of the anime "is a rebroadcast."

Sendai Television is a broadcasting station in northern Japan that is starting its "renewed" airing of the anime on April 7. Kadokawa Shoten published the original Haruhi Suzumiya light novels from Nagaru Tanigawa and Noizi Ito. America's Little, Brown Books for Young Readers is publishing the light novels in English.

@темы: Аниме

---

31.03.2009 в 10:36

Пишет  Anisilla:

А вдруг!

31.03.2009 в 03:42

Пишет  Felichiano Vargas:

/нервно хихикает, дергая глазом/

30.03.2009 в 22:20

Пишет  -Lucciola-:

30.03.2009 в 21:06

Пишет  Ludwig von Deutschland:

30.03.2009 в 20:20

Пишет [J]Ki$@4k@[/J]:

~0_______________о

30.03.2009 в 20:19

Пишет  suslik-san:

(Ф)_(Ф) + ~_^

30.03.2009 в 12:38

Пишет  redson:

0______________________________0

30.03.2009 в 10:08

Пишет  Bast10n7:

27.03.2009 в 14:26

Пишет  Sonyns:

27.03.2009 в 13:31

Пишет  Конзен:

В помощь бедным студентам -___-

27.03.2009 в 12:18

Пишет  Kanzeon Bosatsu:

Значит, говорите, работает...

22.03.2009 в 07:04

Пишет  Эври:

15.03.2009 в 20:39

Пишет  Aliana:

Вот и проверим! *молицо-молицо*

Идиотизм, конечно, но деньги очень нужны %(

А почему бы и нет?

УПД И ведь сработало же!

мне не столько нужны деньги (хотя они лишними не бывают), сколько тупо хочется проверить действительно ли оно работает

а пока пойду гадать над инфой о картинке, вдруг там спрятан тайный шифр и можно сделать такое же с мозгами и прочим ^^

апд, статистика-сан!

Aliana - сработало оО
Sonyns - тоже о_О
Bast10n7 - тоже!
El Qwanto - да, черт возьми!

жду резалтов редсона, Сильвера, Богарта, Алекса, сэра Карнаджа и Шо
ну и своих ^_^

Кольцо. Я в тебя верю. В жерло вулкана не скину. Вместе с пальцем в битве не потеряю. Моя прелесть. Денюшко-денюшко *_*

Кредитка, найдись! Деньги, прийдите! Я во что угодно готов поверить, честно-честно *_______*

@темы: Флешмоб

---

Улько, Тари -- это по вашей части...

31.03.2009 в 11:23

Пишет  Anisilla:

Пятеро щенят ищут новый дом (Москва)!
Помогите кросс-постами, развешиванием объявлений, медикаментами или деньгами!
ОЧЕНЬ нужен водитель до места (30 минут от МКАД в сторону Питера)!



Щенки-дворняжки в данный момент обитают в
утепленной будке в лесу, под присмотром охранников и с едой.
В помете щенки - два рыжих, рыжий с черным ирокезом на спине, два бежевых, один темно-темно коричневый, почти черный.

Дворняги обыкновенные, не вырастут большими - будут не более 50 см в холке.

Каждому желающему приютить одного или нескольких щенят будет выдан весь набор лекарств!
На данный момент у щенков (осмотр у ветеринара + анализ на вирусы):
1. Вши
2. Глисты
3. Рахит
4. Корона-вирус

Все эти заболевания лечатся в течение двух недель, чем мы в данный момент и занимаемся.

1. Шприцы по 2мл в неприличных количествах (около 100 штук)
2. Глистогонное средство для щенков.
3. Витамины для щенков ФАРМАВИТ NEO, упаковки две минимум.
4. Любые средства единичной или двойственной обработки от насекомых-паразитов - спреи, капли на холку.

Отсюда (сообщение все время пополняется новой информацией)

---

Остаётся только ждать...

В 2010 выходит мувик Гандама... чую, что до 2011-го никакого Гиасса в принципе не светит...
At 2011 after throne of Britannia...

@темы: Аниме

---

Санрайз продолжает править рисовку... хотя, то, что забыли про шрам СС при расцензуривании не радует.
forums.animesuki.com/showthread.php?t=38150&pag...
Пост в 08:09

@темы: Аниме, Code Geass

---

Дурдом

Теперь я знаю, как себя чувствовала Балалайка, смотря ту стопку порнухи...
*Пристрелите меня*

@темы: РГМУ

---

HIV

Два факта про ВИЧ:
1. С некоторой долей вероятностью возможно заражение пер-ор. Пока это описано только на младенцах, которых кормили заражённые матери(Африка... а пиндосы вместо того, чтобы предотвратить с энтузиазмом описывали).
2. РФ благополучно обогнала Африканский регион по скорости накопления заражённых. Горжусь Россией, мля.

Ну и в довесок, "курьёзы нашего городка" -- в США не осталось гемофиликов. Ибо у них практикуется не наше "1 донор-1 реципиент", а централизованно сливается и чистится кровь... как известно, почистить от вируса, мягко говоря, не просто. Не знаю, какого года эта информация, но должна быть относительно свежей.

@темы: РГМУ

---

Эпикрожи, несчастная любовь, пьянка за спиной руководства...

25.03.2009 в 21:58

Пишет  Sfeno:

Picture Drama

Хочу это драму прямо сейчас! Что там про Сесиль было? Ну что? Кстати, концовка выглядит как: "мы так веселились, а тут пришли вы с кислыми физиономиями". И да, на С.С. ТО САМОЕ платье, которое выглядит несколько топорным в цвете.

Ну дайте мне уже со звуком!!!

@темы: Аниме, Code Geass

---

Вы самый обыкновенный человек

Вы, как все способны любить, ненавидеть, презирать, мечтать, надеяться, планировать свое будущее. Вас легко вывести из себя, но вы быстро отходите. Вы долго можете идти к намеченной цели. Редко рассчитываете на других людей, пытаетесь все взять в свои руки. Не когда не вините в своих проблемах ближних. Ваша жизнь это постоянный бег вперед и только иногда, когда совсем трудно, вы оглядываетесь назад. Если вам и придется когда-то взять руки оружие, то это будет в целях самообороны. По этому ваше лучшее оружие это - Glock-19, пистолет, калибр 9мм (9х39 Para), Австрия

Пройти тест

@темы: Тесты

---

Для Второго Принца ;)

Если Ваше Высочество ещё не в курсе, то:

24.03.2009 в 20:12

Пишет  Graham Aker:

БЕСИТ.
БЕСИТ, невероятно бесит и выводит из себя факт того, что КОНКРЕТНЫЙ конец 00 будет в МУВИКЕ.

Это вытягивание денег и такая наглость, что у меня пропал дар речи от злости. Типо вот, кушайте 25-тую серию, а потом ждите мувика, там конкретный конец. Как здорово. Насколько лет они это еще протянут?

БЕСИТ.

---

Я СНОВА ГРАЖДАНИН ЭТОЙ СТРАНЫ!!!

В смысле, наконец, получил паспорт, сданный для обмена...

Скачал из локалки Repack для Empire: Total War... вроде пашет без люков, тьфу-тьфу...
Но как засунули всю игру в объём для двух ДВД-5 не понимаю... автор публикакции писал, что ничего не вырезали... Если кому надо, могу записать -- или скачайте у нас, доступ в локалку говнолайна теперь открыт всем.

ПС: Только Россию как всегда обделили... ни гренадёров, ни кавалергардов с кирасирами... зато, как всегда, казаки, и стрельцы(в зелёных мундирах)... в эпоху наполеоновских войн это особенно актуально.
ПС2: Или начало в петровской эпохе... в общем, в любом случае это не извиняет разработчиков.

@темы: Жизнь, Позитив

---

Ибо нехуй жир наращивать...

Тьфу.... натолкнулся в дневнике у Кэт на мрачный пост... и подумалось, какого хуя, собственно?! Я человек стихийный, это всем известно...

Возродим старую традицию? 22.03.09(предлагаю на это, ибо завтра занят, да и поздно уже сегодня), воскресенье, ПМ, 13-00. Планов нет, программы нет, т.е. просто собрались и пошли\поехали куда получилось, как собственно, всегда и было.

Если кого-то не устраивает воскресенье, легко перенести на субботу(только не в этот раз, ибо я очень надеюсь таки получить наконец паспорт).

Итак?

АПД: Как бы напоминаю...

запись создана: 01.01.1971 в 03:00

@темы: Жизнь

---

Конференция

Весьма плодотворно посидел... вполне интересно и понятно всё, кроме частной специфики...
Действительно скучно было на сербах, т.к. переводчики традиционно укуренные студенты, увидевшие текст за 5 минут до конференции. А уровень моего английского далёк от свободного восприятия на слух(текст презентации я понимал в 50-70 процентах, т.е. общий смысл работы доходил)... кроме того, произношение гостей и владение инглишем иногда оставляло настолько желать лучшего, что пиздец.

Не знаю, что с проектором творится, но иногда прочитать слайд было невозможно из-за извращение цветов. Также были яркие образчики "так делать не надо"(в основном сербы) -- цветастый рисунок, закрывающий текст -- не комильфо.

Не смотря на то, что средний уровень работ был высокий (некоторые работы тянули на незавершённые дипломы), "изюминками" секции стали:

1. Сербка с работой, посвящённой описанию поверхностных артерий(и препарированию их на трупном материале) нижних конечностей... я честно не вкурил, что обычная анатомия делает на нашей секции, а не на хирургии, скажем... если только привязка к морфологии... но молекуляркой даже не пахло. На самом деле, вполне достойная работа, много времени и сил, хорошие результаты(описание топографии поверхностных сосудов и прилежащих нервов)... но при чём тут Медико-биологические проблемы?
2. Отдельные индивиды и их "выборки"... смотреть активность действия препарата на выборке из 12 мышей в опыте и 12 в контроле(и при этом не знать достоверность критерия Стьюдента(по которому сам же описывал))... ржал-с. Отдельно, не могу не упомянуть пункт 3.
3. Парень из Узбекистана:
"-- Вы считаете, что контрольная группа из 5 животных -- это репрезентативно?
-- Для уровня студенческой работы, да."
Зал молча лёг... ибо в голос ржать не вежливо.
4. Сербка:
"-- Ваше личное участие?
-- Основную часть экспериментов выполнял профессор... но я ему помогала"
Тут даже Шимановский(кстати, член-корр РАМН), председательствующий в президиуме(из 2-х человек... кстати, что-то он продвигаться при Володине стал активно... ибо вторым там был наш декан), позволил себе кривую улыбку и скользящий комментарий: "ну, всем всё понятно? Вопросов нет?"

@темы: РГМУ, Позитив

---

Ничего святого... и мы ещё заикаемся о возрождении нации...

19.03.2009 в 19:47

Пишет  Шнайзель:

Убивать!
Твари! Придурки!

Только что ( минуту назад ) посмотрел рекламу нового нашего суперблокбастера "Олимпиус Инферно", так кажется называется.

Олигофрены-отморозки!

От себя добавлю, чтобы народ не гуглил.

@темы: Негатив

---

КАКОЙ УРОД ПРИДУМАЛ АРТ С КОТОМ?!

Отзвонился аспирант -- он уходит из аспирантуры. И наверняка вообще уходит с кафедры... надо опять всё идти перетирать с Шефом, причём непонятно, во что это выльется, в каком виде будет практика и где...

Есть запасной вариант в виде МБФовской генетики... что-то начинаю сильно подумывать об этом милом варианте...

@темы: РГМУ, Жизнь, Негатив

---

Пироговка, 19.03.09

Программа IV Международной (ХIII всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции - 2009

РАСПИСАНИЕ РАБОТЫ КОНФЕРЕНЦИИ

8:00 –11:00 Регистрация участников

09:40 – 09:55 Открытие конференции (холл аудитории №1)

10:00 –14:30 Работа секций

15:00 – 19:00 -- всякая хрень, типа школ молодых специалистов, студсамодеятельности, награждения участников конференции и фуршет... всё самое вкусное с 9:40 до 14-30.

Собственно, если у кого есть время, приходите... думаю, вход по паспорту будет свободный(а в ЦНИЛ можно и без оного -- турникет стоит до прохода к конференц-залу... в Главном Здании можно будет затарится спамом, купить интересные и относительно редкие книги.

Проезд: ул. Островитянова, д.1
Либо от м. Юго-Западная маршруткой (не помню номер, она к-ая и написано, что через 2-й мед идёт), автобусом 720(до РДКБ), 718(до остановки "мед универ"), 66(до ост "мед универ").
Либо от м. Коньково -- 36 маршрутка, 295 и 712 автобусы до "мед универ", 145 до "центр матери и ребёнка" и пять минут пешком по Островитянова...
Либо пешедралом 20-30 минут от обеих станций.

Меня можно найти в ЦНИЛе(большое квадратное здание), в конференц-зале, на секции М-Б проблем... либо до начала работы секций хз где... по главному точно шляться буду. После окончания секций я уйду в РДКБ в лабу...

СЕКЦИЯ «АКУШЕРСТВО И ГИНЕКОЛОГИЯ»
Аудитория А-4

СЕКЦИЯ «ВНУТРЕННИЕ БОЛЕЗНИ»
Зал заседаний Ученого Совета РГМУ

СЕКЦИЯ «ДЕТСКАЯ ХИРУРГИЯ»
Аудитория А-2

СЕКЦИЯ «МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ»
Конференц-зал ЦНИЛа

СЕКЦИЯ «ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ»
Аудитория кафедры Общественного здоровья
и здравоохранения

СЕКЦИЯ «ПЕДИАТРИЯ»
Аудитория А-3

СЕКЦИЯ «ПСИХИАТРИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПСИХОЛОГИЯ»
Конференц-зал учебно-спортивного комплекса

СЕКЦИЯ «ХИРУРГИЯ»
Аудитория А-1

ПС: А в силу приказа №40 от 12.03.09 все студенты освобождены от занятий для участия в конференции -- гуд бай, хирургия, и диктанты на ней)))
Кэт желаю хорошо выспаться в этот удачный день...

@темы: РГМУ

---

Б-г-г

18.03.2009 в 08:43

Пишет  Aneris:

Щикарная киса....

17.03.2009 в 22:50

Пишет  Лина Лис:

Не удержалась, чтобы не потырить роскошного кошака

17.03.2009 в 20:22

Пишет  Jenious:

Всплакнул

@темы: Позитив

---

Забыл одну вещь описать... странную.

Мда... вчера был на кафедре Генетики... с Мутовиным всё как всегда, если он понял так, как понял, дальше бесполезно... я ему про практику, он мне про курсач и т.п.

В общем, Шеф озвучил гипотетическую тему курсовой на 5-м курсе -- "ПЦР-диагностика бактериальных инфекций, сопутствующих муковисцидозу"... ладно, здесь всё понятно. Документ для запроса с биохимии по мою душу он подпишет без проблем в любом случае, тьфу-тьфу.

Поговорили с завом генетического отделения. Далее начался эпик -- у меня поинтересовались как можно вытащить бактерии из мокроты, чтобы можно были делать ПЦР сразу по получению материала, без геморроя с посевами.......... причём ход и тон беседы к шуткам не располагал. И на мои мысли по поводу иммуносорбции была реакция человека по типу "слышу в первый раз"... в ахуе.
"Я врач, клиницист. Это по клинике я могу тебе рассказать много. А вся эта молекулярная технология -- это по твоей части"... МБФ МБФом, но пардон, мужику лет 40-50, пишет докторскую, до хрена опыта работы в клинике... перед ним сидит четверокурсник-биохимик, неуверенно выдаёт общие фразы и пытается объяснить, как можно опознать возбудитель(по типу "если мы будем знать маркерную последовательность ДНК возбудителя, то нам его достаточно выделить -- на ПЦР и дальше делать всё, что угодно" -- при этом я без понятия, известна ли эта последовательность(или придётся самим носом рыть), насколько доступны наборы моноклонАт на эти возбудители и т.п.)... при этом лицо у собеседника как у ребёнка, которому объясняют как играть с новой крутой машинкой... я в шоке, чтобы не сказать в ахуе...

В итоге, меня нагрузили "посмотри в интернете", нагрузят аспиранта, и вообще там, возможно, закрутится очень интересная вещь...

АПД: Таки погуглил(вернее, попабмедил)... если кому интересно, может заглянуть под кат.

выдернутые из статей методики\способы выделения и\или анализа синегнойной палочки из мокроты

In situ growth rates and biofilm development of Pseudomonas aeruginosa populations in chronic lung infections.
PMID- 18156255

AB- The growth dynamics of bacterial pathogens within infected hosts are a fundamental but poorly understood feature of most infections. We have focused on the in situ distribution and growth characteristics of two prevailing and transmissible Pseudomonas aeruginosa clones that have caused chronic lung infections in cystic fibrosis (CF) patients for more than 20 years. We used fluorescence in situ hybridization (FISH) directly on sputum specimens to examine the spatial distribution of the infecting P. aeruginosa cells. Mucoid variants were present in sputum as cell clusters surrounded by an extracellular matrix, whereas nonmucoid variants were present mainly as dispersed cells. To obtain estimates of the growth rates of P. aeruginosa in CF lungs, we used quantitative FISH to indirectly measure growth rates of bacteria in sputum samples (reflecting the in vivo lung conditions). The concentration of rRNA in bacteria isolated from sputa was measured and correlated with the rRNA contents of the same bacteria growing in vitro at defined rates. The results showed that most cells were actively growing with doubling times of between 100 and 200 min, with some growing even faster. Only a small stationary-phase subpopulation seemed to be present in sputa. This was found for both mucoid and nonmucoid variants despite their different organizations in sputum. The results suggest that the bacterial population may be confronted with selection forces that favor optimized growth activities. This scenario constitutes a new perspective on the adaptation and evolution of P. aeruginosa during chronic infections in CF patients in particular and on long-term infections in general.

Bacterial isolates.
The P. aeruginosa strain collection examined is listed in Table 2. Clinical P. aeruginosa strains from sputum samples were isolated on Pseudomonas isolation agar (Difco) containing ampicillin (100 μg/ml). All P. aeruginosa isolates were genotyped by single-nucleotide polymorphism typing using AT biochips (Clondiag Chip Technologies, Germany) (22).

Growth media and measurements of growth rates in laboratory media.
Pure-culture growth studies of P. aeruginosa strains were performed under aerobic conditions at 37°C in Luria-Bertani (LB) medium; in pig mucus medium; or in ABT minimal medium (9) supplemented with either 0.2% glucose plus 1% Casamino Acids, 0.5% glucose, 2% Casamino Acids, or 10 mM sodium citrate. The mucus medium was prepared by rinsing pig lungs with 0.9% NaCl. This solution was diluted (1:1, vol/vol) in ABT minimal medium and used for growth studies. CF sputum medium was prepared by dissolving sputum samples from patient p16 in ABT (1:20, vol/vol) by vortexing for 2 min, kept at 4°C for 30 min, and sterilized by filtering through a 0.45-μm filter. All bacteria in the sputa were efficiently removed as evaluated by plating aliquots of the CF sputum medium. Anaerobic growth was performed in LB medium plus 1% nitrate at 30°C with a constant nitrogen flow. Growth rates were measured by monitoring the optical density at 600 nm during growth in 50 ml medium in 250-ml flasks with shaking at 150 rpm. Growth rates are expressed as generation times in minutes or as specific growth rates (ln2/hour [i.e., reciprocal hours]).

Isolation of bacterial cells from sputum samples.
Sputum samples were processed within an hour after expectoration or stored at 4°C for later analysis. The sputum samples could be stored for more than 5 days without effects on growth rate determinations. To determine in situ growth rates, P. aeruginosa cells from sputum samples were extracted by dissolving the sample in 0.9% NaCl. For very thick sputa, Sputaosol (Oxoid, Hampshire, United Kingdom) was used to help dissolve samples. The samples were centrifuged at 800 × g for 5 min at 4°C to remove mucus and epithelial cells. The supernatant which contained bacteria was removed and fixed for rRNA hybridizations as described below.

Oligonucleotide probe.
Probe PSEUDAER (5′-GGACGTTATCCCCCACTAT-3′, specific to P. aeruginosa 16S rRNA (21), was labeled with Cy3 (Molecular Probes, Eugene, OR). The probe has previously been reported to have a sensitivity and specificity of 1.000 (21). Potential cross-reactivity of the PSEUDAER probe is of minor concern, as the probe did not hybridize to Pseudomonas putida cells under the conditions used in this work (data not shown).

Fixation of bacterial cells.
Sputum samples, isolated cells from sputum samples, and cells from laboratory cultures were fixed in 4% paraformaldehyde for 15 min and washed with phosphate-buffered saline (PBS) (pH 7.4). Fixed cells were stored at −20°C in storage buffer (50% ethanol, 10 mM Tris [pH 7.5], 0.1% Nonidet P-40) until use.

Whole-cell hybridization.
Fixed cells were applied homogenously on poly-l-lysine (Sigma Chemical, St. Louis, MO)-coated slides (36) and air dried. Hybridizations were carried out on the slides using 30 μl of solution I (30% formamide, 100 mM Tris [pH 7.5], 0.1% sodium dodecyl sulfate, 0.9 M NaCl) and 80 ng of the PSEUDAER-Cy3 probe. For FISH carried out directly on fresh sputum, hybridization solution was added directly to the sample. The slides were incubated in the dark in a humidified chamber for 3 h at 37°C, followed by washing of the slides with 45 μl of prewarmed (37°C) solution I for 30 min at 37°C and subsequently with 45 μl of prewarmed (37°C) solution II (100 mM Tris [pH 7.5], 0.9 M NaCl) for 40 min at 37°C. The slides were then quickly rinsed in distilled water and air dried. For sputum samples, 50 μl Calcofluor white (CFW) (fluorescent brightener 28; Sigma-Aldrich) was added for staining of alginate and incubated for 3 h in a humidified chamber before washing with distilled water. For FISH counterstained with the fluorescent nucleic acid dye DAPI (4′,6′-diamidino-2-phenylindole), the slides were then incubated in the dark with 14 mM DAPI in PBS at room temperature for 5 min and washed with PBS for 5 min. The slides were then rinsed and air dried.

Microscopy and image analysis.
Microscopic observations of cells within sputum samples were completed using a Zeiss LSM510 scanning confocal laser microscope (Carl Zeiss, Jena, Germany) equipped with an NeHe laser as well as an UV lamp and detectors and filter sets for simultaneous monitoring of red fluorescence emitted from the Cy3 probe (excitation, 543 nm; emission filter, 565 to 615 nm) and CVW fluorescence from fluorescent brightener 28 (UV lamp excitation; emission filter, 395 to 465 nm). Images were obtained using a 40×/1.3 Plan-Neofluar oil objective. Images were processed using the IMARIS software package (Bitplane AG, Zürich, Switzerland).
Visualization of hybridized cells isolated from sputum samples or from laboratory cultures was done using an Axioplan epifluorescence microscope (Carl Zeiss) equipped with a 100-W mercury lamp and a Cy3 filter. A 63×/1.25 Plan-Neofluar oil objective (Carl Zeiss) was used for inspection and image acquisition. Image analysis was done in 12 bits with PMIS-S200 software version 4.1.4 and the Unix-based CELLSTAT image analysis program (38). Hybridized cells were automatically identified by use of the CELLSTAT program, providing cell volume, fraction of dividing cells, and mean fluorescence intensity. In some cases, unfocused cells or images and extremely high-intensity signals from crystals were deleted manually before further analysis.


Increased airway iron as a potential factor in the persistence of Pseudomonas aeruginosa infection in cystic fibrosis
PMID- 17504792
Sputum processing
An aliquot of raw sputum free of salivary contamination was weighed and an equivalent volume to weight of dithiothreitol (10%) was added. The sample was then gently vortexed and placed in a water bath at 38°C for 30 min. At 10-min intervals the sample was removed and gently vortexed once again. If the sample appeared particularly tenacious, further mixing was undertaken with gentle pipetting to ensure homogenisation. The sample was diluted a further five times with PBS, ensuring a constant final dilution of 10 times, and then centrifuged (350xg for 15 min). Following centrifugation, the cell-free supernatant was decanted and stored at -80°C in 1 mL aliquots for later analysis, and the cell pellet re-suspended in PBS for the TCC.
Routine bacterial culture
At the time of sputum processing, an aliquot of raw sputum was sent for routine bacterial culture by the Hospital Pathology laboratory (Rayal Hobart Hospital, Hobart, Australia). P. aeruginosa colonies were identified as being oxidase positive and with typical morphology, i.e. mucoid or nonmucoid, following culture on blood agar aerobically.
Sputum analysis
Sputum TCC were performed on 20 µL of re-suspended cell pellet using a Neubauer haemocytometer (Neubauer, Wertheim, Germany). In addition to inflammatory cells, red blood cells (RBC) and buccal squamous cells were quantified to examine the potential contribution of occult haemorrhage to iron content and the degree of salivary contamination. Sputum samples with any evidence of blood contamination were excluded from further analysis.
Bacterial isolation and quantitative bacterial load determination
The total and P. aeruginosa bacterial loads were determined using an adaptation of the method described by Wong et al. 11. Briefly, CF sputa homogenates were serially diluted in PBS-gelatin (0.1%) and spread onto a variety of culture media, including Pseudomonas selective agar (PSA), an enteric selective agar (MacConkey or Cysteine lactose electrolyte deficient medium) and two horse blood agar (HBA) plates (one used for aerobic and the other for anaerobic incubation). PSA facilitates the isolation and quantification of P. aeruginosa, and characteristic colonies are identified according to their appearance (blue-green or brown-pigmented), having been incubated under aerobic conditions at 37°C. Anaerobic incubation of HBA plates allowed the isolation and quantitation of most other relevant pathogens, such as Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus and Streptococcus pneumoniae (P. aeruginosa does not grow on HBA under anaerobic conditions without nitrogen supplementation). The selection of sputum plugs free of saliva ensured that contamination with bacteria from the oropharynx was minimised. Colony-forming units (CFU) were counted on all plates after incubation for 48 h. Total anaerobic bacterial and P. aeruginosa loads were expressed as CFU•mL–1 of sputum.
Метод изолирования бактерий:
Wong K, Roberts MC, Owens L, Fife M, Smith AL. Selective media for the quantitation of bacteria in cystic fibrosis sputum. J Med Microbiol 1984;17:113–119.[CrossRef][ISI][Medline] [Order article via Infotrieve]


Sequential genotyping of Pseudomonas aeruginosa from upper and lower airways of cystic fibrosis patients
A. Jung1, I. Kleinau1, G. Schönian2, A. Bauernfeind3, C. Chen1, M. Griese4, G. Döring5, U. Göbel2, U. Wahn1 and K. Paul1
PMID- 12503704
The bacterial cultures were diluted on selective media and P. aeruginosa was identified with the API 20 NE system (Bio Mérieux, Marcy-Etoile, France). A positive culture was defined as growth of the organism at any density. Single colonies of any phenotypically different isolates, if obtained from the same culture, were chosen for further investigations. Antimicrobial susceptibility testing was performed by micro-broth dilution. The isolates were frozen at –80°C, recultured on McConkey agar overnight at 37°C and characterised by genotyping techniques.
DNA macrorestriction and PFGE of P. aeruginosa isolates were carried out as previously described 14, with a few modifications. Bacterial isolates were grown overnight at 37°C in tryptone soya broth agar to an optical density of 0.7 ( =590 nm). The suspensions were incubated with 0.5 M ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) and centrifuged for 3 min at 10,000 rpm (Eppendorf Centrifuge 5415D; Eppendorf, Hamburg, Germany). After washing and resuspending the pellets in 100 µL of a sodium chloride/EDTA (SE) buffer (75 mM NaCl, 0.5 M EDTA, pH 7.4), the suspensions were heated to 55°C, and 100 µL of a 2% low melting agarose (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) was added. The suspensions were pipetted into a plug mould and hardened at 4°C. Plugs were incubated in 1 mL of sodium chloride/N-lauryl-sarcosine (SLS) buffer (0.5 M EDTA, 1% SLS, pH 9.5) and proteinase K was added to a final concentration of 0.5 mg•mL–1. The mixtures were incubated overnight at 55°C with gentle shaking. After washing with Tris/EDTA (TE) buffer (5 times over a period of 10 h), 2x5 mm pieces were cut from the plugs and incubated overnight at 37°C with 15 U of the restriction enzyme Spe I (Boehringer, Mannheim, Germany). The reaction was stopped by adding TE buffer (10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8.0). Plugs were loaded onto a 1% agarose gel (Seakem Gold Agarose for PFGE; Bio-Products, Rockland, ME, USA). A clinical P. aeruginosa reference strain, obtained from the authors' laboratory, had been added to each gel for internal control. A molecular size standard (DNA size ladder; Boehringer, Mannheim, Germany) was also included. The slots were filled up with 2% low-melting agarose, and the electrophoresis (Chef-DRII System; Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA, USA) was run in 0.5xTris/borate/EDTA (TBE) buffer using the following ramp conditions: 1–25 s for 24 h at 12°C, with amperage=0.1 ampere (6 volt (V)/cm), voltage=200 V, included angle 120°C. Thereafter, the gels were stained with ethidium bromide, photographed with a Polaroid camera and compared by eye.
All samples were typed in duplicate by reculturing isolates from the frozen stocks. The relationship between typing patterns and interpretation of the results was determined using criteria suggested by Tenover et al. 17. Thus, isolates were considered to be closely related if their PFGE patterns differed in not more than three restriction bands. Isolates that showed fragment differences from four to six bands were judged to be possibly related, whereas strains with more than six different restriction fragments were considered to be genetically unrelated.
Data from both investigations (t1 and t2) were pooled for statistical analysis and sensitivity, specificity and predictive values of respiratory specimens were calculated.

запись создана: 26.02.2009 в 23:56

@темы: РГМУ

---

Проректор жжот

Вопрос:
Уважаемый Анатолий Иванович. Ещё один вопрос. Каким образом вы предлагаете студенческому самоуправлению решить вопрос с курением в женском туалете? Спасибо.

Ответ:
Исходя из смысла вопроса, совет студенческого самоуправления должен попросить ректора университета выставить в каждом женском туалете охранника

ПС: Всё никак не могу решить, кого мне заранее более жалко -- посетителей туалета или охранника...

@темы: РГМУ, Позитив